Препарат пролонгированного действия Иверлонг, его токсикологические и акарицидные свойства

Е.С. Енгашева*, А.П. Бонарцев**, С.Г. Яковлев**

* ГНУ ВНИИВСГЭ, Звинигородское шоссе,5. Москва,123022, Россия,  

**Биологический факультет МГУ им. М.В. Ломоносова, Ленинские горы, д. 1, стр. 12, Москва,119991, Россия,

Введение. Cоздание лекарственных систем пролонгированного действия на основе биоразлагаемых полимеров является приоритетным и перспективным направлением в современной фармакологии. Лекарственные препараты на сегодняшний день в традиционных лекарственных формах не полностью проявляют терапевтический потенциал заключенных в них действующих веществ (ДВ), не устраняют их токсичности и побочного отрицательного действия [4].

Полиоксиалконоаты в последние годы привлекают все большее внимание, благодаря их   способности к биоразложению и высокой биосовместимости, что делает их пригодными для создания новых лекарственных форм [5, 7] .

Использование биосовместимых полимеров в качестве основных форм не только устраняет многие недостатки традиционных препаратов, но и добавляет новые свойства, такие как пролонгированное действие препарата  [3, 4].

Учеными биологического факультета МГУ, института биохимии им. А.Н. Баха и OOO «НВЦ Агроветзащита» разработана лекарственная форма пролонгированного действия ивермектина на основе биоразлагаемых полимеров[1, 2]. Установлено, что препарат в дозе 1мл/50 кг, введенный подкожно профилактировал псороптоз в течение 60 дней.

Целью нашей работы было определение токсикологических и терапевтических свойств препарата «Иверлонг» и испытание его на овцах, спонтанно зараженных клещами Psoroptes ovis.

Материалы и методы исследований. Экспериментальные исследования для решения поставленных задач проводились в лаборатории токсикологии и виварии ВНИИВСГЭ, изучение акарицидного действия на ОПХ Ставропольского края.

Острую токсичность препарата изучали на 60 белых мышах – самцах и 12 белых крысах. Исходный вес животных колебался в пределах 21-22 г для мышей и 135 г для крыс. В опыт брали клинически здоровых животных, которые предварительно выдерживались на 15 – дневном карантине. Статистические группы состояли из 6 животных. При введении препарата в желудок были испытаны дозы – 3,3; 5,0; 7,0 и 8,0 г/кг. Расчет доз производился на 100% лекарственную форму.

При введении препарата под кожу были испытаны дозы 9,0; 12,0; 13,0; 14,0 г/кг. Расчет доз производили на 100% лекарственную форму.

Иммунотоксические и аллергенные свойства препарата изучали согласно Методических рекомендаций [4].

Оценку гуморального и клеточного иммунитета проводили в 2 опытах на 70 белых беспородных мышах весом 18-20г. Клеточный иммунитет изучали в реакции гиперчувствительности замедленного типа, гуморальный – по титрам гемагглютининов.

Акарицидное действие Иверлонга проводили в производственных условиях в 2-х опытах на 61 овцах, спонтанно зараженных клещами Psoroptes ovis при этом были испытаны дозы 1мл и 1,5 мл на 50 кг живой массы. Всего было проведено 2 опыта и испытано 5 серий препарата.

Результаты исследований и их обсуждение. Изучение острой токсичности препарата «Иверлонг» при введении в желудок белым мышам. Результаты определения параметров токсичности представлены в таблицах 1 и 2.

Таблица 1

Результаты острой токсичности препарата «Иверлонг» при введении в желудок мышам

Таким образом, ЛД₅₀ данного средства при введении в желудок составляет 5,2 ± 0,53 (4,67 : 5,73) г/кг (по д.в. – 0,1 г/кг) массы тела. Полученный результат свидетельствует о том, что «Иверлонг» по токсичности находится на границе между умеренно и малотоксичными препаратами 3 - 4 класс опасности [5].

У животных, получавших смертельные дозы, наблюдали клиническую картину интоксикации. На следующие сутки после введения препарата у опытных мышей наблюдали нарушение координации движения, шаткость походки, вскоре животные впадали в кому. На 4-6 сутки часть из них погибла. 

Изучение острой токсичности препарата «Иверлонг» при введении под кожу белым мышам. Результаты определения параметров токсичности представлены в таблице 2.

Таблица 2

Результаты острой токсичности препарата «Иверлонг» при введении под кожу мышам

Полученный результат свидетельствует о том, что данный препарат можно отнести к 6 – му классу «относительно безвредных» соединений [6]. Клиническая картина интоксикации после введения препарата под кожу проявлялась только к следующим суткам и характеризовалась симптомами, аналогичными таковым в условиях введения в желудок.

Иммунотоксические и аллергенные свойства Иверлонга. Установлено, что препарат в терапевтической и десятикратно увеличенной дозах вызывал умеренное усиление клеточной реакции формирования гиперчувствительности замедленного типа. Индекс РГЗТ составил 9,64 ± 1,27 % и превысил показатель контроля на 55,5%. Препарат не обладает токсическим действием по титрам гемагглютининов и индексам действия препарата на клетки иммунной системы и составил 0,98 и 0,89 функционирование которых обеспечивает развитие гуморальных реакций.

По результатам эпикутанного тестирования, внутрикожной и конъюнктивальной проб, реакции дегрануляции тучных клеток и содержанию эозинофилов можно сделать вывод об отсутствии у препарата аллергенных свойств.

Акарицидное действие Иверлонга. Акарологические исследования  препарата в опыте № 1, проведенные 20 декабря 2011 года свидетельствуют, что из 31 овцы клещей Psoroptes ovis находили у 18, как взрослые формы – имаго, так и личинки на разных стадиях развития. Они вызвали дерматиты, что характеризовалось сильным зудом, расчесами и выпадением шерсти с пораженных участков кожного покрова.

Акарологические исследования были проведены через 19, 24, 36, 48 и 62 дня после введения препарата. При акарологических исследованиях проведенных 30 декабря  через 6 дней после введения испытуемых препаратов, отмечали у овец опытных и контрольной (леченной ивомеком) групп  мертвых клещей Psoroptes ovis на стадии имаго и еще живых личинок. У животных этих групп прекратился зуд и практически не было видно расчесов, на кожном покрове воспалительный процесс в стадии затухания.

При акарологических исследованиях на 19 и 24 дни после лечения, мы не находили у овец опытных  и контрольной (леченной ивомеком) групп имаго и личинок  клещей Psoroptes ovis. У овец этих групп не было видно расчесов, на пораженных участках кожного покрова отросла новая шерсть на  0,7 - 1 см.

У всех 5-ти овец контрольной (не леченой) группы находили живые имаго и личинки клещей Psoroptes ovis, отмечался сильный зуд и расчесы с выпадением шерсти с пораженных участков кожного покрова.

При акарологических исследованиях проведенных на 48 сутки, как и в предыдущих исследованиях, не находили у овец опытных и контрольной (леченной ивомеком) групп имаго и личинок клещей Psoroptes ovis. У овец этих групп не было видно расчесов, на пораженных участках кожного покрова отросла новая шерсть.

У всех 5-ти овец контрольной (не леченой) группы находили живые имаго и личинки клещей Psoroptes ovis, отмечался сильный зуд и расчесы с выпадением шерсти с пораженных участков кожного покрова

При акарологических исследованиях, проведенных на 62 сутки после введения препарата, мы зарегистрировали у всех овец опытных и контрольной групп большое количество имаго и личинок клещей Psoroptes ovis. У овец этих групп отмечался сильный зуд, были видны расчесы с выпадением шерсти с пораженных участков кожного покрова. Опыт был завершен, все животные были обработаны против псороптоза.

При акарологических исследованиях овец по опыту № 2 (опыт начат 15 апреля 2012 г.), проведенный через 12 дней после введения испытуемых препаратов, отмечали у овец опытных  и контрольной (обработанных  ивомеком) групп  мертвых клещей Psoroptes ovis на стадии имаго и еще живых личинок. У овец этих групп прекратился зуд и практически не было видно расчесов, на кожном покрове воспалительный процесс в стадии затухания.

При акарологических исследованиях проведенных на 18 и 29 сутки, мы не находили у овец опытных и контрольной (леченной ивомеком) групп имаго и личинок клещей Psoroptes ovis. У овец этих групп не было видно расчесов, на  пораженных участках кожного покрова. У овец контрольной (не леченной) группы были обнаружены живые имаго и личинки клещей Psoroptes ovis, отмечался сильный зуд, расчесы и выпадение шерсти с пораженных участков кожного покрова.

При акарологических исследованиях проведенных на 43 сутки, мы не находили у овец опытных и контрольной (леченной ивомеком) группах взрослых и личинок  клещей Psoroptes ovis.

У всех овец контрольной (не леченной) группы находили живые имаго и личинки клещей Psoroptes ovis, отмечался сильный зуд, расчесы и выпадение шерсти с пораженных участков кожного покрова.

При клиническом осмотре и акарологических исследованиях, проведенных на 53 сутки, у овец опытных групп не находили имаго и личинок клещей Psoroptes ovis, однако отмечался сильный зуд и клинические признаки псороптоза, хотя очагов поражения мы не нашли.

У овец контрольной группы, констатировали большое количество имаго и личинок клещей Psoroptes ovis. У овец этой группы отмечался сильный зуд, были видны расчесы с выпадением шерсти с пораженных участков кожного покрова.

По результатам стрижки проведенной 4-5 июля было установлено следующее: -у овец, получавших образец препарата № 1, мы отмечаем очаги поражения кожи в небольшом количестве (1-3) размером около 2-х см. Заражение произошло 12-13 июня (через 2 месяца после обработки); -у овец, обработанных  препаратом № 2 и 3, также находили поражение кожи. Очагов поражения кожи больше, чем в первой группе и  их диаметр равен 2-5 см. Заражение произошло  4-5 июня (через 50 дней после обработки); - у овец, обработанных ивомеком, отмечали большое количество очагов поражения кожи размером 5-10 см. Заражение произошло  29-30 мая (через 46 дней после обработки); - у овец контрольной не леченной группы регистрировали генерализованную форму чесотки.

При акарологическом исследовании у овец во всех группах, мы регистрировали имаго и личинок клеща Psoroptes ovis.

9 июля 2012 года была проведена обработка всех 30 овец против чесоточного клеща Psoroptes ovis препаратом ивомек в дозе 1,5 мл/50 кг живой массы тела, подкожно. Каких-либо отклонений в поведении овец во время и после введения препаратов не отмечали.

Заключение. Препарат «Иверлонг», согласно классификации (ГОСТ 12.1.007-76), в условиях однократного введении в желудок находится на границе между умеренно и мало токсичными соединениями, т.е. относится к 3-4-ому классу соединений (ЛД₅₀ = 4,67 : 5,73 г/кг). Препарат вызывает умеренное усиление клеточной реакции формирования гиперчувствительности замедленного типа и не обладает токсическим действием на клетки иммунной системы, функционирование которых обеспечивает развитие гуморальных реакций.

Подводя итог работы по испытанию двух серий нового пролонгированного препарата (опыт № 1), по результатам акарологических и клинических исследований  установлено, что две серии нового препарата,  как и известный  акарицид – ивомек,  профилактировали  псороптоз у овец  в течение  45-50  дней

По результатам акарологических и клинических исследований по опыту № 2 при  испытании  трех серий нового пролонгированного препарата установили, что образец №1 нового препарата профилактировал псороптоз в течение 60 дней. Препараты образца № 2 и 3 профилактировали  псороптоз в течение 50 дней, а  известный  акарицид – ивомек  профилактировал  псороптоз у овец  в течение  46  дней. Исследования продолжаются.

Работа выполнена при поддержке ГК № 16.512.11.2019  Министерства образования и науки РФ.

Библиографический список.

1.                      Манзюк Л.В. Таксол в клинической практике: Дозы и режимы введения таксола// Н.И. Переводчикова. Изд. «Полина»- М, 2001, С. 25-54.

2.                      Chen C. Q. Biomaterials. 2005. 26. 6565-6578.

3.                      Park J., Ye M., Park K. Molecules. 2005, 10 (1), 146-161.

4.                      Методические указания по изучению общетоксического действия фармакологических веществ // Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ, 2000, М.

5.                      ГОСТ 12.1.007-76. «ССБТ Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности», М.,1976.

6.                      Измеров Н.Ф., Саноцкий И.В.,Сидоров К.К. Параметры токсикометрии промышленных ядов при однократном воздействии. Справочник. М., 1977.

7.                      Красовский Г.Н. Егорова Н.А. и др. Среднее время гибели животных, как параметр для прогнозирования хронической токсичности веществ. Кн. Актуальные вопросы экологической токсикологии М.,1978, с.44-76

PREPARATION IVERLONG, TOXICOLOGICAL  AND ITS  ACARICIDAL  ACTIVITY

E.E. Engasheva, A. P. Bonartsev, S.G. Yakovlev

Our data on the toxicology Iverlong show that the studied drug belongs to a 3-4 - to class of compounds (LD50 = 4,67: 5,73 g / kg) according to the classification (GOST 12.1.007-76) is a non-pyrogenic and has a high therapeutic efficacy and profilaktе Psoroptes ovis within 60 days.